戊型肝炎的病原血清学诊断试剂
目前尚不能在组织培养上获取供诊断用的病毒抗原、化学合成抗原肽和cDNA重组抗原。两者组装的EIA试剂在检测抗HEV-IgG时敏感性和特异性相似。
B1 化学合成寡肽抗原,由位于第二读码框架3′端的B细胞表位决定簇的42个氨基酸和第三读码框架的3′端的33个氨基酸组成,对第一读码框架的依赖于RNA的RNA聚合酶区的部分氨基酸也有合成。此三个读码框架中以第二、三读码框架为优势表位决定簇,一框架的聚合酶片段较差。
B2 CDNA重组抗原:用原核细胞分别表达的第二、三读码框架的3′端编码多肽,证明具有抗原性,可用作组装诊断试剂盒的抗原材料,将第二、三读框的B细胞表位决定簇片段嵌合表达可得嵌合多肽,对第二、三读框都有抗原反应,并且抗原性较分别表达的肽段强。当前国内外检测戊型肝炎均用EIA.其基本原理是:
在聚苯乙烯板孔内在碱性条件下包被纯化的戊肝抗原,饱和吸附后洗净未结合的抗原,加待检血清标本(1∶20稀释)洗净,加入由辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体(如检测IgG则加标记的抗人IgG,如检测IgM型抗体则加抗人μ链抗体)如果血清中抗HEV阳性,标记抗体可与抗HEV结合,温育,洗净后加OPD底物显橙黄色,在492nm波长下光吸收值(OD值)越大表示阳性强度越大,无色则表示阴性反应。其阳性判定值各厂家产品均有说明。操作方法及注意事项均有说明,在此不多述。
抗HEV-IgM在疾病的早期出现,可作为HEV病原分型诊断的重要判定标准,从初步的临床检测结果看HEV-IgM的反应强度低于甲型肝炎,持续的时间也较短。因此在病人入院时立即采血做1∶50稀释检测抗HEV-IgM,最晚不能迟于发病后半个月,因抗HEV滴度较低,故凡抗HEV-IgM阳性应检测类风湿因子,如类风湿因子阳性同时抗HEV-IgM阳性时应再进一步稀释血清进行验证,如抗HEV-IgM仍阳性类风湿因子阴性,诊断成立。亦可先用抗人IgG与待检血清预先中和,仍能检出IgM则可判为抗HEV-IgM阳性。当前所用的间接IgM检测法特异性较捕捉法差,有待进一步改进。整理
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